少妇被又大又粗又爽毛片久久黑人,又爽又黄无遮挡高潮视频网站,男男19禁啪啪无遮挡免费,国产欧美日韩精品丝袜高跟鞋

技術(shù)文章您的位置:網(wǎng)站首頁 >技術(shù)文章>血管生成實(shí)驗(yàn)步驟-實(shí)驗(yàn)方法完善版

血管生成實(shí)驗(yàn)步驟-實(shí)驗(yàn)方法完善版

更新時(shí)間:2018-06-28   點(diǎn)擊次數(shù):4504次

前言
      無論原發(fā)性腫瘤還是繼發(fā)性腫瘤,一旦生長(zhǎng)直徑超過1~2 mm,都會(huì)有血管生成。這是由于腫瘤細(xì)胞自身可分泌多種生長(zhǎng)因子,誘導(dǎo)血管生成。多數(shù)惡性腫瘤的血管生成密集且生長(zhǎng)迅速。因此,血管生成在腫瘤的發(fā)展轉(zhuǎn)移過程中起到重要作用,抑制這一過程將能明顯阻止腫瘤組織的發(fā)展和擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。于是體外的血管生成實(shí)驗(yàn)就能很好的模擬腫瘤的血管發(fā)生過程,并且適合研究藥物對(duì)這一過程的影響實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)以HUVEC細(xì)胞為例,介紹這一實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)過程。

圖一  血管生成鏡檢圖

一.實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法
 
1.實(shí)驗(yàn)材料

2.實(shí)驗(yàn)方法:
2.1實(shí)驗(yàn)流程介紹

圖二  實(shí)驗(yàn)流程圖

(提前將Matrigel融化,鋪于ibidi血管生成載玻片的下孔中,待膠凝后,將細(xì)胞懸液加入血管生成載玻片上孔中,成管后使用顯微鏡觀察。)

2.2耗材結(jié)構(gòu)介紹

圖三   血管生成載玻片縱截面示意圖

(Matrigel鋪在下孔,細(xì)胞鋪在Matrigel上,上孔充滿培養(yǎng)基)

2.3數(shù)據(jù)分析流程介紹

圖四  實(shí)驗(yàn)結(jié)果收集和分析流程圖
(在特定的時(shí)間點(diǎn)采集圖片,并且進(jìn)行圖像分析(Wimasis全自動(dòng)分析)測(cè)量小管長(zhǎng)度,成環(huán)數(shù),細(xì)胞覆蓋面積和結(jié)點(diǎn)。之后在對(duì)測(cè)量結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析以說明實(shí)驗(yàn)結(jié)果。)

一.實(shí)驗(yàn)步驟
1、準(zhǔn)備基質(zhì)膠
1.實(shí)驗(yàn)前一天將Matrigel置于冰盒中,放入4。C冰箱,使膠能guo夜緩慢融化。(注意:同樣要準(zhǔn)備一些4。C預(yù)冷的槍頭用于吸取Matrigel)
2.開始實(shí)驗(yàn)前,將Matrigel始終保持放在冰盒中。
3.打開滅菌包裝,取出ibidi血管生成載玻片。
4.每孔中加入10μl Matrigel。注意槍頭要垂直于內(nèi)孔的正上方加入Matrigel,防止有Matrigel流經(jīng)上孔而留下殘留膠。

由于Matrigel流動(dòng)性不強(qiáng),并且有可能移液槍不準(zhǔn)確,有可能打入10μl的膠,卻不能填滿血管生成載玻片的下孔——這樣,必然會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)的成像結(jié)果。

如何判斷是否加入了合適體積的Matrigel:
我們只需用一張格子紙就能知道自己的移液槍調(diào)整到多少能正好把下孔填滿。

如上圖所示,垂直透過每個(gè)孔看下面的格子紙,如果格子被縮小了,那么就說明膠沒加滿,格子被放大了,那么膠就加多了,格子沒發(fā)生什么變形,這才是剛剛加滿下孔的狀態(tài)。
 
2、凝膠
1.蓋上ibidi血管生成載玻片的蓋子。
2.準(zhǔn)備一個(gè)10cm的培養(yǎng)皿,放入浸過水的紙巾,制成一個(gè)濕盒。
3.將ibidi血管生成載玻片放入培養(yǎng)皿中,蓋上培養(yǎng)皿蓋。
4.將整個(gè)培養(yǎng)皿放入培養(yǎng)箱中,靜置30分鐘左右,等待膠凝結(jié)。
5.等待同時(shí)準(zhǔn)備細(xì)胞懸液。

3、鋪細(xì)胞
加入細(xì)胞的量直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,所以在正式實(shí)驗(yàn)開始之前,要對(duì)不同類型的細(xì)胞和使用數(shù)量進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。獲得*比例的細(xì)胞密度。我們今天的實(shí)驗(yàn)使用HUVEC細(xì)胞,每孔種10000個(gè)細(xì)胞即可。
1.準(zhǔn)備密度為2*105cells/ml的細(xì)胞懸液,充分混勻。
2.將膠已經(jīng)凝固的ibidi血管生成載玻片從濕盒中取出。
3.每孔加入50μl的細(xì)胞懸液,注意保持槍頭垂直在上孔的上方,不要接觸下孔的凝膠。可以使用排槍。
4.同樣用格子紙查看是不是加了足夠量的液體,如果沒有,加入無細(xì)胞的培養(yǎng)基,使上孔液體正好加滿。
5.蓋上蓋,靜置,一段時(shí)間后,所有細(xì)胞都會(huì)沉下去落在Matrigel的表面。

4、采集圖像并統(tǒng)計(jì)結(jié)果
可以按照細(xì)胞的生長(zhǎng)速度定時(shí)采集圖像,并且對(duì)其成管長(zhǎng)度,覆蓋面積,成環(huán)數(shù),結(jié)點(diǎn)數(shù)進(jìn)行測(cè)量和記錄,并且對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

5、.免疫熒光染色
根據(jù)需要,可以對(duì)成管結(jié)果進(jìn)行免疫熒光染色。
小心的移除上孔內(nèi)培養(yǎng)基,注意不要碰到膠或者細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)。
加入50μl用無血清培養(yǎng)基稀釋的calcein (12.5 µl calcein stock 1 µg/µl),使其終濃度為 6.25 µg/ml (1:160)。
在室溫下避光孵育30分鐘。
使用PBS清洗三次,注意,PBS要緩緩加入上孔,以免沖擊掉細(xì)胞。
使用 485 nm/ 529 nm進(jìn)行免疫熒光成像。

實(shí)驗(yàn)優(yōu)勢(shì)
1.這個(gè)實(shí)驗(yàn)方法能節(jié)省更多基質(zhì)膠,降低實(shí)驗(yàn)成本;
2.分上下孔的ibidi血管生成載玻片能去除凹液面,使成像效果更好。

(左側(cè)ibidi血管生成載玻片無凹液面,整個(gè)視野成像清晰;右側(cè)96孔板有凹液面,中間清晰周圍模糊。)

 

 

網(wǎng)站首頁 關(guān)于我們 新聞中心 產(chǎn)品中心 聯(lián)系我們
備案號(hào):浙ICP備14014839號(hào)-1   GoogleSitemap   技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) 管理登陸
©2025  衢州新芝生物科技有限公司(h99168.com) 版權(quán)所有 總訪問量:355156

浙公網(wǎng)安備 33080202000501號(hào)

成年奭片免费观看午夜网站| 日本丰满bbwbbw| 国产av一区二区三区传媒| 97无码欧美熟妇人妻蜜桃天美| 成在人线无码AⅤ免费视频| 国产午夜激无码av毛片app| 久久久久久AV无码免费网站| 人妻精品久久久久中文字幕一冢本 | 国产96在线 | 欧美| 秋霞在线看片无码免费| 好久不见在线观看免费高清| 亚洲国产激情一区二区三区| 欧美疯狂做受xxxx高潮| 国产又色又爽又黄又免费| 欧美dancepartyhd| 粗大黑人巨精大战欧美成人| 进女小姪女体内的视频| 八戒八戒视频在线www观看| 久久亚洲中文字幕无码 | AV国产剧情MD精品磨豆| 欧美成人一区二免费视频 | 中文字幕人妻偷伦在线视频| 亚洲av熟女国产一区二区三区 | 天堂√中文最新版在线下载| 国产一区二区三区四区精华| 欧美黑人性暴力猛交喷水| 亚洲国产欧美国产第一区| 国产精品18久久久久久| 久久国产免费观看精品3| 亚洲精品区无码欧美日韩| 精品国产一区二区三区久久| 国产精品爽爽v在线观看无码| 国产在线拍小情侣国产拍拍偷| 欧美大屁股XXXX高跟欧美黑人 | 亚洲精品尤物av在线观看任我爽| 男男吹潮视频chinese| 精品无码久久久久久尤物| 99久久久无码国产精品免费砚床| yellow在线观看高清| 老地方在线观看免费资源| 中文在线天堂中文|